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ELISA实验代测|百科

更新日期: 2024-03-13
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  ELISA是一种常用的免疫学检测技术,可以用于检测血液、尿液、唾液、霉菌、病毒、细菌等生物样品中的蛋白质、抗体、肽等生物分子。
 
  ELISA全名是酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunosorbentassay)的缩写,是一种利用酶标记化的抗体或反体与待检测物(抗原或抗体)结合,从而间接或直接检测目标分子的技术,属于免疫学中的非放射性标记方法之一。
 
  ELISA实验代测步骤:
 
  一般分为六个步骤:涂覆微孔板、酶标记化的抗体反应、样品添加、次级抗体结合、添加底物、测量光密度。
 
  1.涂覆微孔板
 
  将捕获抗体、配体或抗原涂覆在微孔板上,使之附着在微孔板的底部或壁上,固定在样品检测位置或加标准的位置。同时,涂覆后还需要加入一些特殊蛋白或物质,例如牛血清白蛋白(BSA)等,将微孔板的其他部分进行屏蔽,以防止非特异性结合。
 
  2.酶标记化的抗体反应
 
  将酶标记化的初级抗体与样品或标准物质反应,待时间到达绝大部分初级抗体与待检测物或标准物质特异性结合时,将液不冲洗干净。
 
  3.样品添加
 
  将待检样品加入涂覆好初级抗体的微孔板中,让待检样品以及标准物质特异性结合到微孔板上涂覆好的初级抗体中。该过程也需要将板子洗液清洗干净。
 
  4.次级抗体结合
 
  将酶标记化的次级抗体加入孔内,经过适当的反应时间,使之与待测样中的物质结合。该步骤结束后,需要将板子进行洗涤,以消除非特异性结合。
 
  5.添加底物
 
  将含有酶基团的底物加入微孔板中,例如TMB、ABTS等底物,如果样品物质合适,底物在酶催化下会产生显色反应。直观表示是微孔板中某些孔的液体呈现橘黄色,根据底物种类的不同,孔底深度和底物的反应时间也会有所不同。
 
  6.测量光密度
 
  在吸光度计或ELISA检测仪器上对微孔板进行读数,根据微孔板中总体积、底物的反应时间和吸收量来计算样品中待检测物质的浓度。通常,结果是一个数字,可以根据该数字来评估待检测物质的存在程度或含量。
 
  实验注意事项:
 
  1.微孔板的处理
 
  微孔板是ELISA实验中的重要物品,拆开之前必须放在干净的环境中进行消毒,尽量避免接触锐器或其他锐利物品,使用完后及时封闭保存,避免受到污染。
 
  2.操作流程的严谨性
 
  实验需要严格的操作流程和重复性,每个流程必须按照操作规程进行,且操作者必须熟练掌握操作技巧和注意事项,避免因操作不当引起实验的误差。
 
  3.化学品的正确使用
 
  实验中需要使用各种化学试剂,包括酶标记的抗体、底物、缓冲液、洗涤液等,每个化学品都有其特殊的储存、使用和处理方法,必须按照说明书的要求进行正确使用,避免发生安全事故或影响实验结果。
 
  4.数据的分析
 
  ELISA测量数据的分析非常重要,必须进行合理的分析和解释,避免由于数据误差或结果解释不当而导致实验结论的错误。
 

 


 
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