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ELISA实验操作流程

更新日期: 2021-06-22
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前期准备工作:

实验前样本和试剂盒室温平行1小时,如果样本是冻存样本,应提前拿到2-8摄氏度进行解冻(不建议直接室温解冻)

准备好实验所需耗材,蒸馏水(去离子水)。

操作流程描叙:

  1. 将要进行实验的版孔进行设定好,标准品5个点,每个点设定平行,需要用到10个孔,空白只需1个孔。剩下孔可以做为样本孔
  2. 稀释标准,准备好5EP管,然后在每个EP管中加入150微升标准稀释液,编上编码,分别为1234,5,在1号管中加入150标准品,用枪头反复吹打10次左右(注意控制幅度不要过大容易产生气泡)如果有涡旋仪可以在涡旋仪上涡旋5秒左右,然后换枪头,在1号管中取150微升加入到2号管,后面过程一次类推。最后稀释完,前面4个管中每管液体在150微升,5号管为300微升。浓度是从大到小。
  3. 标准、样本、空白加样:标准是每个浓度点2个孔(做平行),每孔加入50微升,加样过程中注意换枪头,样本孔中每孔加入50微升,加样过程中注意换枪头,空白孔加入50微升标准稀释液或者样本稀释液。特别要说明的是,标准加样和样本加样尽量控制在15分钟内加完,如果时间拖的太长,会导致前面孔先反应后面孔才开始反应,这样数值偏差过大。加完样后盖上封板膜,至37摄氏度孵育30分钟.
  4. 洗版,在孵育过程中可以将洗涤液配好,20ml30倍浓缩洗涤液用蒸馏水或者去离子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗涤液(不要漫过版孔),(如果有震荡仪的话,可以讲板子放入震荡仪上5秒左右,然后静止三十秒,没有请忽略次过程)将板子在桌子上晃动5秒左右,然后静置30秒,甩干,拍板。说明:甩干过程尽量要快,1秒内就可以完成,不要慢慢倾斜倒掉液体,直接翻板甩掉液体即可。拍板过程需要在桌子上垫一层吸水纸或者滤纸,版孔朝下拍几下,拍干区别主要看吸水纸和滤纸上没有明显的水渍为完成。
  5. 每孔加入50微升的酶标试剂,此处在空白孔中不需要加(空白孔为空),孵育30分钟。
  6. 洗版同步骤4
  7. 显色,先每孔中加入50微升的显色A液,然后每孔中加入50微升显色B液。避光37摄氏度显色15分钟
  8. 终止,每孔加入50微升的终止液,注意,加完终止液必须在15分钟内读数,超过时间读数无效。在规定时间内读数都是有效的。

至此,整个实验结束

 

需要额外提醒的是:在做完整个实验过仪器之前,仪器最好预热半小时,这个计算好时间,也可以直接将仪器一直开着,直到整个实验结束。

在加液过程中不要使枪头触及到板子底部,一般枪头都悬空,可以将枪头靠在孔边缘,但枪头尖悬空,如果枪头上残留液体看整体多少量,不要吹打下去。特别忌讳在版孔内壁流向版孔。整个加液过程不要产生气泡。(洗涤液除外)

 

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