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通用型全基因组扩增试剂盒模板变性观察

更新日期: 2022-12-10
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通用型全基因组扩增试剂盒(WGA)是用于基因组DNA扩增全基因组的试剂盒,可以方便、简单、快速、经济的得到稳定产量的基因组DNA扩增样品。产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、 文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异, 微卫星差异,SNP,STR)等。操作简便快捷,恒温(30℃)反应,无须PCR仪即可实现扩增。本产品只能用于科研。
模板变性:
1. 在PCR塑料管中加入9μL WGA溶液A,加入1μL纯化好的基因组DNA模板 (DNA含量在10ng-100ng之间)。
2. 在PCR仪器上95℃3分钟变性模板DNA。注意:必须打开热盖。
3. 冰上放置待用。
4. 加入10μL 2×WGA溶液B,轻柔吹打混匀。
5. 加入1μL phi 29 DNA聚合酶(10U/μL),轻柔吹打混合均匀。
6. 30℃保温10-12小时。使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴,在样品管中加入30-50μL石蜡油以防水分蒸发,因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁,从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高,WGA三小时即可检测到DNA扩增。
7. 65℃保温20分钟使phi29 DNA聚合酶灭活,然后-20℃长期放置或立即使用。注:由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以强烈推荐反应结束后65℃保温20分钟以将酶灭活以免其干扰后续反应或长期保存时其降解DNA。
 
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