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霍乱弧菌O139(VC O139)核酸检测试剂盒的操作使用

更新日期: 2023-04-11
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霍乱弧菌O139(VC O139)核酸检测试剂盒适用于ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
1、试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管数每满10份,多配制 1份),每测试反应体系配制如下表:将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21μL/管。

2、加样(样本处理区)
将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。
3、 PCR扩增(核酸扩增区)
3.1  将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
3.2  设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;
荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光,选择None即可。
3.3  推荐循环参数设置:

4、结果分析判定
4.1  结果分析条件设定
设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
4.2  结果判断
阳性:检测通道Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;
可疑:检测通道35值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35值≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性;阴性:样本检测结果Ct值>38或无Ct值。
5、质控标准
阴性质控品:Ct>38 或无Ct值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

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