培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有水、氮源、无机盐(包括微量元素)、碳源、生长因子(维生素、氨基酸、碱基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。培养基是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
基础调节原则:
调节时机--定容完成后、灭菌前调节pH,灭菌后需复核(高压灭菌可能导致pH下降0.2–0.5)--所有培养基配制流程
调节剂选择--1M-6M NaOH或HCl(高浓度减少体积误差)--微生物/植物/动物细胞培养
目标范围--
- 植物组培:pH5.6-6.0(常用5.8)
- 细菌培养:pH6.5-7.5(中性偏碱)
- 真菌培养:pH4.0-6.0(酸性)
操作细节:
分步调节法:
定量加入调节剂后充分搅拌,静置1-2分钟再检测,避免局部过酸/碱;
少量多次添加(每次 ≤0.5ml),接近目标值时改用低浓度调节剂微调;
植物组培中,若初始pH>6.0,需用0.1M HCl回调至5.8±0.1。
缓冲系统应用:
对代谢产酸微生物(如乳酸菌),添加 磷酸盐缓冲剂(pH6.4-7.2)或碳酸盐缓冲剂;
动物细胞培养需CO₂-碳酸氢钠缓冲体系维持pH7.0-7.4。