植物可溶性蛋白(sprotein)ELISA试剂盒用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中植物可溶性蛋白(sprotein)的浓度。剂盒应用双抗原夹心法测定标本中指标表达。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中指标相结合,经过彻-底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)与待测样品中植物可溶性蛋白(sprotein)浓度呈正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中植物可溶性蛋白(sprotein)的浓度。
操作步骤:
实验前准备:
试剂盒从冷藏环境取出后,室温平衡30分钟,所有试剂使用前充分摇匀,避免局部浓度不均。
提前设置空白孔、标准品孔、待测样本孔,做好标记,避免后续加样混淆。
提前配置好洗涤液,按说明书比例用超纯水稀释,备用。
加样孵育:
标准品孔加入不同浓度的标准品50μL,待测样本孔加入预处理好的样本10μL,再加入样本稀释液40μL。
每孔加入100μL酶标试剂,空白孔不加,封板膜密封后37℃恒温孵育60分钟。
洗涤显色:
小心揭掉封板膜,弃去液体后甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复5次,拍干孔内残留液体。
每孔先后加入显色剂A、B各50μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
终止读数:
每孔加入50μL终止液,此时蓝色液体立即转为黄色。
以空白孔调零,15分钟内用酶标仪在450nm波长处依次测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线计算样本中植物可溶性蛋白的实际含量。