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甲型流感病毒(IAV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)新品

发布日期: 2023-03-29
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甲型流感病毒(IAV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)新品

【产品名称】

商品名称:甲型流感病毒(IAV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)新品

Name :Avian Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】50T/盒

【预期用途】

甲型流感是由甲型流感病毒(AIV)引起的一种禽类传染病,鸡、火鸡、鸭和鹌鹑等家禽均可感染,发病情况

差别较大,有的出现急性死亡,有的无症状带毒。水禽是 AIV 的自然宿主,也是流感病毒的天然基因库,几乎

所有亚型的流感病毒都可以在水禽中分离到[1]。在世界范围内,家禽中流行的主要有 H5、H6、H7、H9 等亚型。

H5 和 H7 亚型的某些毒株可以造成禽类很高的发病率和死亡率,被称为高致病性甲型流感(HPAI)病毒。OIE 将

高致病性甲型流感列为 A 类动物疫病,我国也将其列为一类动物疫病[2-3]。

本试剂盒利用实时荧光 PCR 原理,检测甲型流感病毒,对甲型流感诊断有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对甲型流感病毒 M 基因高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含甲型流感病毒基

因组模板的情况下,PCR 反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时

监测和输出,实现检测结果的定性、定量分析。

【试剂组成】

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注:1)不同批号试剂不能混用。

2)试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5 次,有效期12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀动物,取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织;待检活动物,用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄

物,置于 1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,

严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生

理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离

心管中;棉拭子直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2 核酸提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提

取,请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管数

每满10 份,多配制1 份),每测试反应体系配制如下表:

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将混合好的测试反应液分装到PCR 反应管中,21uL/管。

3. 加样(样本处理区)

将步骤1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,

短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;荧光通道选择:

检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择ROX 参比荧光,

选择None 即可。

4.3 推荐循环参数设置:

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5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置Baseline 和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像

调节Baseline 的start 值(一般可在3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在5~20 范围内调节),以及Threshold 的

Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性:检测通道Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35<Ct 值≤38,且曲线有明显的增长曲线,

判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果Ct 值>38 或无Ct 值。

6. 质控标准

阴性质控品:Ct>38 或无Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct 值≤32;以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.检测方法的局限性

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2.样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3.阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4.病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5.不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6.试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7.本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行;

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心;

3.反应液应避光保存;

4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

[1] Webster R G, Bean W J, Gorman O T, et al. Evolution and ecology of influenza A viruses [J]. Microbiological

Reviews, 1992, 56(1): 152-179.

[2] Shortridge K. Avian influenza A viruses of southern China and Hong Kong: ecological aspects and implications for

man [J]. Bulletin of the World Health Organization, 1982, 60(1): 129.

[3] 张烨, 舒跃龙. 2004–2012 年我国甲型流感流行情况 [J]. 中华实验和临床病毒学杂志, 2013, 27(3): 239-240.【生

产企业】

企业名称:上海晅科生物科技有限公司


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