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产品名称:

猪伪狂犬病毒实时荧光PCR试剂盒

产品型号: 产品时间: 2019-04-10
猪伪狂犬病毒实时荧光PCR试剂盒采用聚合酶链反应(PCR )技术检测猪血清和组织中的PRV,适用于PRV的检测、诊断和流行病学调查

产品概述

  猪伪狂犬病毒实时荧光PCR试剂盒使用说明
  【试剂盒简介】
  猪伪狂犬病毒实时荧光PCR试剂盒,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测猪血清和组织中的PRV,适用于PRV的检测、诊断和流行病学调查。
  【原理】
  提取DNA作为模板,在DNA聚合酶的作用下,经高温变性、低温退火和中温延伸的多次循环,使特异DNA片段的拷贝数放大数百万倍。将扩增的DNA片段进行电泳、染色后,在紫外灯下,肉眼可见DNA片段的扩增带。
  【试剂盒组份】

1. 裂解液 8mL 8. 阳性对照  
2. 蛋白酶K 110μL 9. 0.2 mL 薄壁PCR 管 15个
3. 抽提液 8mL 10. PCR 反应液A 180μL
4. 异丙醇 7mL 11. PCR 反应液B 50μL
5. 洗涤液 12mL 12. 50 倍TAE 电泳缓冲液 20mL
6. 无菌水 500μL 13. 染色液  
7. 阴性对照 300μL   10μL

注:塑料袋内试剂(阳性对照、蛋白酶K、PCR反应液A和B)-20 ℃冻存,其他室温保存。

黄曲霉毒素M1检测试剂盒(酶免)
三聚氰胺检测试剂盒(酶免)
磺胺二甲基嘧啶检测试剂盒(酶免)
孔雀石绿定量检测试剂盒(酶免)
金霉素定量检测试剂盒(酶免)

  
  【猪伪狂犬病毒实时荧光PCR试剂盒操作方法】
  一、病毒DNA的提取
  1.取出已处理的样品、阴性对照和阳性对照,分别加入600µL抽提液(用抽提液之前不要晃动,不要吸到上层保护液),用力颠倒10次混匀,12,000rpm离心10min。
  2.取500µL上清置于灭菌离心管中,加入500µL异丙醇,混匀,置液氮中3min或-70℃冰箱中30min。取出样品管,室温融化,13,000rpm离心15min。
  3.弃上清,沿管壁缓缓加入1mL洗涤液,轻轻旋转一周后倒掉,将离心管倒扣于吸水纸上1min,再将离心管真空抽干15min或37℃烘干。
  4.用30µL无菌水溶解沉淀,作为模板备用。
  二、样品制备
  1样品采集:病死或扑杀的猪,取大脑海马背侧皮层、中脑、脑桥、扁桃体、淋巴结等组织;待检活猪,用棉拭子取鼻腔分泌物,置于50%甘油生理盐水中,或用注射器取血5mL,2~8℃保存。(要求送检病料新鲜,严禁反复冻融。)
  2样品处理:
  2.1组织样品的处理:称取组织0.1g于研磨器中磨碎,再加1mL生理盐水继续磨至无块状物;然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心5min,取上清100µL于1.5mL灭菌离心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混匀后37℃温育1h。
  2.2全血样品的处理:待血凝后取血清放于离心管中,8000rpm离心5min,取上清100µL于1.5mL灭菌离心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混匀后37℃温育1h。
  2.3阳性对照的处理:混匀后取100µL于1.5mL灭菌离心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混匀后37℃温育1h。
  2.4阴性对照的处理:混匀后取100µL于1.5mL灭菌离心管中,加入500µL裂解液和10µL蛋白酶K,混匀后37℃温育1h。
  三、PCR
  1.反应体系:分别取16µLPCR反应液A(用前混匀)、2µLPCR反应液B(用前混匀)和2µL模板DNA,混匀。
  2.反应程序:在PCR仪上运行以下程序:94℃3min;94℃30s、55℃30s、72℃30s,35个循环;72℃延伸10min。
  四、电泳
  1.制胶:用50倍稀释的TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶。
  2.电泳:待胶凝固后,取5µLPCR扩增产物点样于琼脂糖凝胶孔中,以5V/cm的电压于50倍稀释的TAE电泳缓冲液中电泳。
  3.染色:取50倍稀释的TAE电泳缓冲液30mL,加入10µL染色液,混匀后将胶浸泡30min,于紫外灯下观察结果。
  【结果判断】
  阳性对照出现400bp扩增带,阴性对照无带出现(引物带除外)时,实验结果成立。被检样品出现400bp扩增带为猪伪狂犬病毒阳性,否则为阴性。
  【需用但未提供的材料】
  组织研磨器、眼科剪、眼科镊、一次性注射器、琼脂糖、灭菌1.5mL离心管和吸头(10µL、200µL、1000µL)。
  【猪伪狂犬病毒实时荧光PCR试剂盒注意事项】
  1.本试剂盒有效期为6个月,不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的组分不要混用。
  2.所有试剂应在规定的温度储存,使用时拿到室温下,使用后立即放回。

 

 

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