禽脑脊髓炎抗体elisa检测试剂盒使用说明书
【用途】
用来检测鸡血清中的禽脑脊髓炎病毒(AEV)抗体
【试验原理】
禽脑脊髓炎,也称雏鸡传染性颤搐病,主要通过鸡蛋传播,感染鸡和易感鸡或成年禽之间亦可发生水平传播。青年鸡(1~4周龄)主要临床表现为共济失调、麻痹或头颈快速震颤等症状,成年鸡表现为产蛋能力下降。血清中的病毒抗体可通过酶联免疫的方法检测。血清中的AEV抗体水平及整个鸡群的免疫状况可用ELISA方法进行监测。
将灭活的AEV抗原包被在微孔板上,加入稀释后的血清并孵育,血清中的抗AEV抗体将与包被在微孔板上的AEV结合,形成AEV抗原-抗体复合物。然后洗掉未结合的物质,加碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG的酶标结合物至微孔板中,酶标物将与AEV抗原-抗体复合物结合。孵育后洗掉未结合的结合物,然后加入底物溶液。底物与碱性磷酸酶反应并生成一种有颜色的产物,后终止反应,将颜色固定。颜色的深浅可用酶标仪(405-410nm)测定。
【主要组成成份】
序号 | 名称 | 规格(48T/96T) | 序号 | 名称 | 规格(48T/96T) |
1 | 包被板 | 12孔×4/8条 | 7 | 终止液(6号液) | 6ml×1瓶 |
2 | 酶结合物(1号液) | 3/6ml×1瓶 | 8 | 阳性对照品 | 0.8ml×1支 |
3 | 浓缩洗涤液(2号液) | 25/50ml×1瓶 | 9 | 阴性对照品 | 0.8ml×1支 |
4 | 底物(3号液) | 6ml×1瓶 | 10 | 不干胶膜 | 1/2片 |
5 | 显色剂(4号液) | 6ml×1瓶 | 11 | 自封袋 | 1个 |
6 | 样本稀释液(5号液) | 25/50ml×1瓶 | 12 | 说明书 | 1份 |
【储存条件及有效期】
1. 2~8℃避光保存,防止冷冻,有效期为12个月。
2. 包被板开封后2~8℃避光保存,使用期限为15天。
【适用仪器】
含450nm和630nm波长酶标仪;37℃恒温设备;可调微量移液器。
【样本要求】
1. 为取得Z佳实验效果,避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品;
2. 短期(7天)将进行检测的血清样品可存放于2~8℃;如需长期保存,应置于-20℃或以下,避免反复冻融。
【检验方法】
百日咳凝集反应用抗原 |
荚膜型肺炎球菌诊断血清 |
弯曲菌诊断血清 |
单增李斯特菌诊断血清 |
毒素原性大肠菌纤毛抗血清 |
1. 洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液(2号液)按1:10稀释(如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作洗涤液。
2. 样本稀释:用样本稀释液(5号液)将待检血清按1:100稀释(如5μl血清+495μl样本稀释液),充分混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释,直接加样。
3. 加样反应:每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔(分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μl)。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μl。37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次,每次均需停留1分钟;后一次甩净,拍干。
4. 加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶结合物(1号液)1滴,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗涤,拍干。
5. 显色反应:加底物(3号液)和显色剂(4号液)各1滴,混匀,37℃下避光显色10分钟。
6. 终止反应: 加终止液(6号液)1滴,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。
【参考值】
1. Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值<0.08时按0.08计)。
2. 有效性判定:
空白对照孔OD值<0.05(若大于0.05则实验无效);
阴性对照孔OD值≤0.10(若大于0.10则实验无效);
阳性对照孔OD值≥0.30(若小于0.30则实验无效)。
【检验结果的解释】
样本OD值≥COV值时,判为禽流感病毒抗体阳性;
样本OD值<COV值时,判为禽流感病毒抗体阴性。
【检验方法的局限性】本试剂仅适用于检测鸭血清。
【注意事项】
1. 包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时,应平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中,4℃密封保存。
2. 滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀,首滴弃去;滴加试剂时瓶身应保持竖直。
3. 瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。
4. 孵育时,推荐使用水浴箱。如无水浴箱,可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。
5. 用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。
公司优势:
1)质量:我司提供的的试剂均经过出厂检测。不对可退换
2)价格:价格实惠,量大从优,产品价格随时会变动,实时报价还请来电获取。
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除了禽脑脊髓炎抗体elisa检测试剂盒我公司还提供:
肠炎弧菌溶血毒素检测试剂盒 |
霍乱菌及大肠菌热敏毒素检测试剂盒 |
黄色葡萄球菌表皮剥脱毒素检测试剂盒 |
金葡菌休克毒素试剂盒 |
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