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产品名称:

禽流感病毒RT-PCR核酸检测试剂盒

产品型号: 产品时间: 2019-04-10
禽流感病毒RT-PCR核酸检测试剂盒,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR )技术检测禽组织、分泌物和排泄物中所有亚型的AIV,适用于AIV的检测、诊断和流行病学调查。

产品概述

产品介绍

禽流感病毒RT-PCR核酸检测试剂盒说明书

【试剂盒简介】

禽流感病毒RT-PCR 检测试剂盒,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR )技术检测禽组织、分泌物和排泄物中所有亚型的AIV,适用于AIV的检测、诊断和流行病学调查。

【原理】

利用吸附柱提取RNA作为模板,在反转录酶的作用下,以引物为起点合成与RNA 模板互补的cDNA链;然后在DNA 聚合酶的作用下,经高温变性、低温退火和中温延伸的多次循环,使特异DNA 片段的拷贝数放大数百万倍。将扩增的DNA 片段进行电泳、染色后,在紫外灯下,肉眼可见DNA 片段的扩增带。 

大肠菌O157检测试剂盒(玻片乳胶凝集反应法)
大肠埃希氏菌血清
志贺氏菌诊断血清
无菌脱纤维马血
无菌脱纤维兔血

【试剂盒组份】

1. 生理盐水

20mL

8. 吸附柱和收集管

10套

2. 裂解液

6mL

9. 0.2 mL 薄壁PCR 管

15个

3. 洗涤液A

7mL

10. RT-PCR 反应液A

180μL

4. 洗涤液B

7mL

11. RT-PCR 反应液B

50μL

5. 洗脱液

500μL

12. 50 倍TAE 电泳缓冲液

20mL

6. 阴性对照

300μL

13. 染色液

10μL

7. 阳性对照

300μL

 

 

注:塑料袋内试剂(阳性对照、RT-PCR反应液A和B)-20 ℃冻存,裂解液2-8℃冷藏,其他室温保存。

【操作方法】

一、样品制备

1样品采集::病死或扑杀的禽,取肺、脾、脑等组织;待检活禽,用棉拭子取呼吸道分泌物,放于50%甘油生理盐水中或用注射器取血5 mL,2~8 ℃保存。(要求送检病料新鲜,严禁反复冻融。)


2.1 组织样品的处理:称取组织0.1g于研磨器中磨碎,再加1mL生理盐水继续磨至无块状物;然后将样品转至1.5 mL灭菌离心管中,8000 rpm离心2 min,取100 µL上清于1.5 mL 灭菌离心管中。2样品处理:

2.2 全血样品的处理:待血凝后取100 µL血清于1.5 mL 灭菌离心管中。

2.3 阳性对照的处理:取阳性对照 100 µL于1.5 mL 灭菌离心管中。

2.4 阴性对照的处理:取阴性对照100 µL于1.5 mL 灭菌离心管中。

二、病毒RNA的提取

1. 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照,分别加入450µL裂解液,充分颠倒混匀,室温静置3min 。

2. 加入275µL无水乙醇,轻轻混匀。

3. 将混合液吸入吸附柱中(吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质,以免离心时堵塞吸附柱),10,000 rpm 离心1min,弃去收集管中液体,套回收集管。

4. 向吸附柱中加入500µL洗涤液A,10,000 rpm 离心1min,弃去收集管中液体,套回收集管。

5. 向吸附柱中加入500µL洗涤液B,10,000 rpm 离心1min,弃去收集管中液体,套回收集管。

6. 空柱10,000 rpm 离心2 min。

7. 将吸附柱移入新的无RNA酶的1.5 mL离心管中,在膜中央加入30µL洗脱液,室温静置2min,10,000 rpm 离心1min,获得总RNA。

三、RT-PCR

1. 反应体系:分别取14µL RT-PCR反应液A(用前混匀)、4µL RT-PCR反应液B(用前混匀)和2µL模板RNA,混匀。

2. 反应程序:在PCR仪上运行以下程序:42 ℃ 45 min,94 ℃ 3 min ;94 ℃ 30 s 、53℃ 30 s 、72 ℃ 30 s,35个循环;72 ℃延伸10 min。

四、电泳

1. 制胶:用50倍稀释的TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶。

2. 电泳:待胶凝固后,取5µL PCR扩增产物点样于琼脂糖凝胶孔中,以5V/cm的电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳。

3. 染色:取50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液30mL,加入10µL染色液,混匀后将胶浸泡30min,于紫外灯下观察结果。

【结果判断】

      阳性对照出现400bp扩增带,阴性对照无带出现(引物带除外)时,实验结果成立。被检样品出现400bp扩增带为新城疫病毒阳性,否则为阴性。

【需用但未提供的材料】

      组织研磨器、眼科剪、眼科镊、一次性注射器、琼脂糖、经焦碳酸二乙酯(DEPC )处理的灭菌1.5mL 离心管和吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)。

【注意事项】

1.本试剂盒有效期为6个月,不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的组分不要混用。

2.所有试剂应在规定的温度储存,使用时拿到室温下,使用后立即放回。

3.注意防止试剂盒组分受污染。使用前将塑料袋内试剂瞬离15s,使液体全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。

4.严格按试剂盒说明书操作可以获得Z好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。

5.RNA提取过程中,应戴口罩、勤换手套,尽量缩短操作时间。

6.所有接触病料的物品均应合理处理,以免污染实验室。

 

公司优势:
1)质量:我司提供的的试剂均经过出厂检测。不对可退换
2)价格:价格实惠,量大从优,产品价格随时会变动,实时报价还请来电获取。
4)服务:提供完整的售前、售后和售中服务。售后到底

除了禽流感病毒RT-PCR核酸检测试剂盒??我公司还提供:

A群溶血链球菌T型检测用诊断血清
B群链球菌检测试剂盒(玻片乳胶凝集反应)
A群链球菌检测试剂盒(玻片乳胶凝集反应)
肠炎弧菌检测用诊断血清
沙门氏菌诊断血清

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