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产品名称:

高致病禽流感病毒H7亚型HP-H7荧光PCR试剂盒

产品型号: 产品时间: 2023-07-05
高致病禽流感病毒H7亚型HP-H7荧光PCR试剂盒根据高致病性H7亚型禽流感HA 基因裂解位点设计特异性引物和探针, 在反应体系中含高致病 H7 亚型禽流感病毒基因组模板的情况下,PCR 反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出, 实现检测结果的定性、定量分析。

产品概述

高致病禽流感病毒H7亚型HP-H7荧光PCR试剂盒说明书

【产品名称】

商品名称:高致病性禽流感病毒 H7 亚型(HP-H7)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)

Name :Highly Pathogenic Avian Influenza Virus subtype H7 Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

禽流感是由正粘病毒科流感病毒属的 A 型流感病毒引起的一种禽类或人类感染的传染病,分为非致病性、低致病性和高致病性三类[1]。高致病性禽流感是家禽的重要烈性 传染病,发病率和病死率可高达 100%,对养禽业危害极大。H7 亚型禽流感因 HA 基因裂解位点的差异表现为高低致病性,及时检测 H7 亚型流感致病性具有重要意义。

本试剂盒利用实时荧光 PCR 原理,检测高致病 H7 亚型禽流感病毒,对高致病H7 亚型禽流感引起的流感的诊断有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒根据高致病性H7 亚型禽流感HA 基因裂解位点设计特异性引物和探针, 在反应体系中含高致病H7 亚型禽流感病毒基因组模板的情况下,PCR 反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出, 实现检测结果的定性、定量分析。

【试剂组成】

名 称

规 格

酶液

50μL×1 管

HP-H7 反应液

1.0mL×1 管

HP-H7 阳性质控品

50μL×1 管

阴性质控品

250μL×1 管

注:

1) 不同批号试剂不能混用。

2) 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀禽,取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织;待检活禽,用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物,置于 1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;棉拭子直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2 RNA 提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的RNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

HP-H7 反应液

酶液

用量

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;荧光通道选择:

检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3 推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、

stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0和明显扩增曲线者为阳性,否则为阴性。

阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

6. 检测方法的局限性

Ø 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

Ø 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

Ø 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

Ø 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

Ø 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。

7. 质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线且无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

【注意事项】

Ø 所有操作严格按照说明书进行;

Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,*混匀并短暂离心;

Ø 反应液应避光保存;

Ø 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;

Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

  • Chaharaein B, Omar A R, Aini I, Yusoff K, Hassan S S. Detection of H5, H7 and H9 subtypes of avian influenza viruses by multiplex reverse transcription polymerase chain reaction. Microbiological Research, 2009, 164(2): 174-179.
  • Chmielewski R, Swayne D E. Avian influenza: public health and food safety concerns. Annual Review of Food Science and Technology, 2011, 2:37-57.

【生产企业】

企业名称:上海烜雅生物科技有限公司

 

公司优势:
1)质量:我司提供的的试剂为世界
2)价格:价格实惠,量大从优。
4)服务:提供完整的售前、售后和售中服务。售后到底

如需订购高致病禽流感病毒H7亚型HP-H7荧光PCR试剂盒,请联系我们。

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