细菌DNA/RNA提取试剂盒

【产品名称】

通用名    ：细菌DNA/RNA提取试剂盒（吸附柱法）

Name      ：DNA Extraction Kit（Adsorption column method）

【产品介绍】

本试剂盒可以从多种样本中提取基因组DNA，包括动物内脏、肌肉组织、血液以及培养的细胞和细菌等。本法基于对基因组DNA具有高度选择性的高分子膜材料，只需几个步骤即可完成提取过程，在30分钟内完成高纯度DNA的提取。

本试剂盒提取的DNA可以用于Real-time PCR、测序等分子生物学实验。

【产品原理】

动物内脏、肌肉组织、血液以及培养的细胞和细菌等样本在裂解液和蛋白酶K的作用下破碎并可使大部分蛋白质变性，释放出基因组DNA。在其所提供的合适的盐离子和pH环境的作用下，与乙醇混合后，基因组DNA特异性地结合于膜上，大部分蛋白质及其他杂质在两次洗涤过程中被洗下，而DNA与膜结合牢固，在洗脱液的作用下被洗下。

【试剂组成】

【试剂规格】50 T/盒。

【储存运输】蛋白酶K保存于2~8℃。其余成分可室温储存。保存得当可稳定使用18个月。

【自备材料】

灭菌的1.5mL离心管、各种规格灭菌的枪头、离心机（大转速不小于14,000rpm）、无水乙醇、漩涡震荡器等。

细菌DNA/RNA提取试剂盒【操作步骤】

蛋白酶K放于2~8℃冰箱保存，使用时取出。

1. 样本处理

（1）全血：

a）如果全血体积大于200μL，请先使用红细胞裂解液或淋巴细胞分离液收集细胞，然后用200μL PBS缓冲液或生理盐水充分重悬，进行步骤2。

b）如果样本不足200μL，可以加入适量的PBS缓冲液或者生理盐水补足200μL，进行步骤2。

       c）从人血液中提取DNA的方法与从哺乳动物血液中提取DNA的方法相同。

d）从鸟类血液中提取的DNA需将不多于20μL血液样本，加PBS缓冲液至200μL，混合后开始提取，进行步骤2。

（2）组织样本：

每份组织分别从不同的三个位置称取1g，用手术剪剪碎混匀后取约50mg置于研磨器中，加入0.5mL-1mL生理盐水研磨，匀浆后转入1.5mL灭菌的离心管，8000rpm离心2分钟，取上清200μL加入1.5mL离心管，进行步骤2。

（3）培养的细胞：

       悬浮细胞：细胞培养液3000rpm离心2分钟，去上清，收集2×10⁶个细胞（容积200μL），转移至1.5mL离心管，进行步骤2。

       贴壁细胞：去上清，收集2×10⁶个细胞（容积200μL），转移至1.5mL离心管，进行步骤2。

（4）其他液体样本：

1000rpm离心2分钟 ，弃上清，收集沉淀，进行步骤2。

（5）菌液：

       培养的菌液，5000rpm离心1分钟，弃上清，收集至少2×10⁶个细菌，进行步骤2。

1. 将200μL上述样本和10μL 蛋白酶K加入一只新的1.5mL离心管，然后加入200μL 裂解液，震荡混匀5-10秒。
2. 56℃温育10分钟。
3. 在上述离心管中加入200μL无水乙醇，充分震荡混匀5-10秒(此步骤不可离心)。
4. 将步骤4混匀的液体吸取至一只套有收集管的吸附柱上（注意不要吸到悬浮的杂质，以免阻塞吸附膜），6000-8000rpm离心1分钟，弃去管内液体。
5. 将500μL去蛋白漂洗液加入吸附柱中，10000rpm离心30-60秒，弃去管内液体。
6. 将700μL 洗涤液加入吸附柱中，10000rpm离心30-60秒，弃去管内液体。
7. 将吸附柱放回接液管上，13000rpm离心2分钟。
8. 将吸附柱转移到一只干净的1.5mL离心管（不提供）中。
9. 向吸附柱内加50-100μL 洗脱液，室温静置1分钟，13000rpm离心1分钟，弃吸附柱，离心管中液体含有基因组DNA。提纯的DNA如果不立刻使用，请保存于-20℃。

【注意事项】

1. 本试剂盒适用于不多于200μL的全血基因组提取，大于200μL的血液建议用红细胞裂解液或淋巴细胞分离液处理后将白细胞富集，然后进行后续操作。

2. 适用于从动物内脏、肌肉组织、血液，以及培养的细胞和细菌等样本提取DNA。

3. 新鲜血液存放于2-8℃中或者-20℃保存。

4. 提取的DNA含量少或者基本没有的原因：

  1）样本中细胞过少；2）蛋白酶K没有保存在2-8℃，活性降低。

5．提取鸟类血液时，将样本、蛋白酶K和裂解液混合后液体非常粘稠，需减少样本使用量，20μL鸟类血液加入PBS缓冲液稀释至200μL。