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产品名称:

霍乱弧菌O1(VC O1)核酸检测试剂盒

产品型号: 荧光PCR法 产品时间: 2023-03-08
霍乱弧菌O1(VC O1)核酸检测试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对霍乱弧菌O1(VC O1)特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对霍乱弧菌O1(VC O1)的核酸进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学检测。

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

产品概述

霍乱弧菌O1(VC O1)核酸检测试剂盒

【产品名称】

通用名称:霍乱弧菌O1(VC O1)检测试剂盒(荧光PCR法)

【包装规格】50T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测样本中的霍乱弧菌O1(VC O1),用于霍乱弧菌O1(VC O1)感染的辅助诊断。

【检验原理】

霍乱弧菌O1(VC O1)核酸检测试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对霍乱弧菌O1(VC O1)特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对霍乱弧菌O1(VC O1)的核酸进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学检测。

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【核酸提取】

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取,请按照试剂说明书进行操作。


1.    试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管数每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:


将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21μL/管。


2.    加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。


3.    PCR 扩增(核酸扩增区)

3.1  将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

3.2  设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择

ROX 参比荧光,选择 None 即可。

3.3  推荐循环参数设置:


4.    结果分析判定

4.1  结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

4.2  结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35值≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。


5.    质控标准

阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。


6.    检测方法的局限性

6.1 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

6.2 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

6.3 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

6.4 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

6.5 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6.6 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

6.7  本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。


【注意事项】

1.    所有操作严格按照说明书进行;

2.    试剂盒内各种组分使用前应自然融化,*混匀并短暂离心;

3.    反应液应避光保存;

4.    反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5.    使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6.    样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7.    实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8.    试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【生产企业】

企业名称:上海晅科生物科技有限公司

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