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elisa酶联免疫试剂盒|百科

更新日期: 2024-03-13
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  一、简介
 
  elisa酶联免疫试剂盒是酶免疫测定技术中应用很广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
 
  二、成分
 
  试剂盒内包括以下试剂:
 
  1.酶标板(96孔板)
 
  2.血清检测抗体试剂(固定在小板上)
 
  3.特异性标记兔抗人IgG辣根过氧化物酶(HRP)
 
  4.HRP底物染色液
 
  5.固定酶标板的NaCI-Pi缓冲液
 
  6.去污液
 
  7.色谱纯洗板缓冲液
 
  三、样本类型
 
  本试剂盒可检测不同种类的生物样本,包括:血清、血浆、组织抽提物、阳性参考样本、阴性对照样本等。不过首先要保证样本与试剂之间无相互干扰。
 
  四、储藏
 
  应于2-8℃的阴凉干燥处存放。如需长期贮存,应冷冻保存(-20℃或-80℃)。
 
  五、试剂准备
 
  1.酶标板制备:首先,在每个空白小孔板的每个孔中,添加50μL的PBS(0.01M)。然后将板放入一个旋转式混合器中,温和混合,管孔覆盖在对应的坑孔区域上,将坑孔以180度反转,然后在抽走液体后,再次将坑孔埋入缓冲液中,丢弃PBS。最后,将板于坑孔中添加100µl的固定抗体,每个备件(坑孔)尽可能多添加固定抗体。
 
  2.样品制备:将样品与样品稀释液按照比例混合。
 
  3.销量质控制备:将阳性参考样本与阴性对照样本准备好。
 
  六、操作步骤
 
  1.将酶标板每个小孔内填充50µL固定酶标记性抗体时,将板制备至2-8℃下存储20小时。
 
  2.将液态样品溶于样品稀释液中,使样品达到适合检测的浓度。样品应避免过度稀释或过度浓缩。
 
  3.然后,向每个小孔中加入50µl的稀释后的样品,以及50µl的阳性参考样本、50µl的阴性对照样本。
 
  4.使用封板膜密封,并在37℃恒温箱中孵化60分钟。
 
  5.丢弃所有的液体,并在试剂盒内水龙头下冲洗各个小孔以清除未被绑定的物质。
 
  6.将200υl洗板缓冲液加入每个小孔中,用废液槽放置一段时间后,倒掉,重复此操作至少3次。
 
  7.向每个小孔中加入50µl的HRP标记羊抗人IgG,孵化37℃下30分钟。
 
  8.重复步骤6以清除未结合的物质。
 
  9.将50µl的HRP底物添加到每个小孔,并在黑暗中置于室温静止15分钟。
 
  10.停止反应,加入50µl停止液应用于每个孔中。
 
  11.读取OD值测量各小孔校准曲线,计算样本的质量浓度。
 
  七、注意事项
 
  1.在开封后要存放于适当的保存条件下。
 
  2.操作前检查所有步骤的操作方法和准备工作。
 
  3.下一步操作前,须确保上一步的操作完成,并按照试剂盒内的实验步骤进行。
 
  4.空白对照、阳性对照和含待测物品的样品需分别分管的水龙头下漂洗小孔。
 
  5.如需要测量微量的样品,需使用微量孔板。
 
  八、禁忌事项
 
  1、本检测盒内禁止使用过期试剂。
 
  2、禁止本试剂盒内的试剂与其他试剂或活性物质混合使用。
 
  3、禁止口服或其他接触本试剂盒内的试剂。如发生皮肤敏感现象或可能影响人体内部健康,应进行医学干预。
 
  九、适用范围
 
  本检验盒被广泛运用于检测各类疾病,如传染病、自身免疫性疾病,肿瘤标志物、突变基因等。
 
  十、质控
 
  在正常操作中,该检测盒可保证准确性和可重复性。如果使用中发现问题,请先尝试实验操作流程,如仍然无法解决,可向生产厂家进行垂询。
 
  以上就是对Elisa酶联免疫试剂盒的说明书,希望各位用户在使用本试剂盒时一定要加倍谨慎,按照说明书操作,以确保检测结果准确无误。

 


 
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