您的位置: 网站首页 >> 技术文章 >> 细胞培养基的操作步骤 你了解吗

细胞培养基的操作步骤 你了解吗

更新日期: 2020-12-16
浏览人气: 1004
  细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境,是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养液或培养基的含义几乎相同,英文都是medium。当它是粉剂时,倾向性地称为培养基,而将粉剂配成液体后,多称为培养液。培养液中常常补加血清、抗生素等成分。
 
  步骤:
 
  一、复苏
 
  1.把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
 
  2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
 
  3.把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
 
  4.标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
 
  5.3天换一次培养基。
 
  二、传代
 
  1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
 
  2.把原有培养基吸掉。
 
  3.加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
 
  4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
 
  5.用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
 
  6.把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
 
  7.倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。
 
  8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个,继续培养。
 
  三、冻存
 
  把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。
分享到:
版权所有©2019 上海晅科生物科技有限公司 备案号:沪ICP备19006485号-1
  • 扫一扫,关注我们