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原代细胞的培养质量至关重要

更新日期: 2020-12-25
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  原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,通常把一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养,是细胞培养中很重要的,其质量决定着传代细胞的质量,因此它的培养的质量至关重要。
 
  原代细胞是非常敏感的细胞,需要传统培养基之外的额外营养物质。为了优化存活和生长,需要针对每种细胞类型选择特定的培养基。例如,内皮细胞对营养的需求与上皮细胞或神经元有很大区别,因此需要特制的内皮细胞培养基。而传统的细胞培养基依靠血清提供生长因子、激素、脂质和其他的未知组分,以支持细胞的生长。但对于原代细胞,高血清水平可导致细胞分化,或促进污染细胞如成纤维细胞的生长。
 
  此外,添加血清也受到成本上升及不同批次间差异性的困扰。配制具有很少或没有血清的特殊培养基则可以避免这些问题,并且更加有利于促进特定类型细胞的生长。此外,其他一些实践,例如在更多的生理学相关底物上接种原代细胞而不是使用合成聚合物,可以显著的促进细胞贴壁、增殖及保持纯度。
 
  实验步骤:
 
  1.试剂耗材准备;
 
  2.取新鲜动物组织;
 
  3.酶消化;
 
  4.过滤网筛选、分离细胞;
 
  5.加培养液,37℃、5%CO2培养;
 
  6.传代;
 
  7.冻存;
 
  8.复苏。
 
  应用:
 
  1.为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段;
 
  2.为传代培养创造条件;
 
  3.服务于临床实践,用于药物筛选等。
 
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