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检测试剂盒在实际测定操作中要注意以下几点

更新日期: 2021-08-30
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  检测试剂盒原理,DNA包被特殊处理带有高DNA亲和性的微孔板上,8-OHdG通过捕获抗体和检测抗体来检测.通过酶标仪可以检测结果.大量得8-OHdG与光密度值成比例。
 
  检测试剂盒实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
 
  实验原理:本实验采用双抗体夹心ELISA法。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本,再加入生物素标记的识别抗原,在三十七度下孵育三十分钟,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原,然后加入亲和素-HRP,亲和素-HRP与生物素抗原结合,洗涤后结合的HRP催化TMB成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在一定波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
 
  检测试剂盒具有敏感性高,特异性强,快速等特点,目前广泛应用于农兽药、真菌残留检测,该方法从加样、洗板、显色到读数步骤繁多,其中任何一步控制不好都可能影响检测结果的准确性。因此,在实际测定操作中要注意以下几点。
 
  1.试剂盒回温
 
  检测试剂盒为冷藏(2℃-8℃)保存。从冰箱拿出来后,先不要急于打开试剂盒,要等试剂盒的温度平衡至室温且试剂盒盒表面无冷凝水,检测所用的试剂需充分混匀且*溶解后再用,提前1~2小时取出试剂盒,放在室温中;或在预设25℃恒温培养箱中平衡30分钟~60分钟。
 
  2.环境温度的控制
 
  1)实验室应配备温湿度表,且确保定期计量。
 
  2)根据天气情况设定实验室空调制冷或加温功能,待室温稳定且无干扰的条件下再开始检测流程。
 
  3)选用带温控装置的孵育仪器,如恒温孵育器、恒温培养箱、多功能酶标仪等。注意要提前开启预热。
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