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使用细菌DNA/RNA提取试剂盒时样本该如何处理

更新日期: 2022-06-21
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细菌DNA/RNA提取试剂盒(吸附柱法)的原理介绍:
动物内脏、肌肉组织、血液以及培养的细胞和细菌等样本在裂解液和蛋白酶K的作用下破碎并可使大部分蛋白质变性,释放出基因组DNA。在其所提供的合适的盐离子和pH环境的作用下,与乙醇混合后,基因组DNA特异性地结合于膜上,大部分蛋白质及其他杂质在两次洗涤过程中被洗下,而DNA与膜结合牢固,在洗脱液的作用下被洗下。
样本处理
(1)全血:
a)如果全血体积大于200μL,请先使用红细胞裂解液或淋巴细胞分离液收集细胞,然后用200μL PBS缓冲液或生理盐水充分重悬,进行步骤2。
b)如果样本不足200μL,可以加入适量的PBS缓冲液或者生理盐水补足200μL,进行步骤2。
c)从人血液中提取DNA的方法与从哺乳动物血液中提取DNA的方法相同。
d)从鸟类血液中提取的DNA需将不多于20μL血液样本,加PBS缓冲液至200μL,混合后开始提取,进行步骤2。
(2)组织样本:
每份组织分别从不同的三个位置称取1g,用手术剪剪碎混匀后取约50mg置于研磨器中,加入0.5mL-1mL生理盐水研磨,匀浆后转入1.5mL灭菌的离心管,8000rpm离心2分钟,取上清200μL加入1.5mL离心管,进行步骤2。
(3)培养的细胞:
悬浮细胞:细胞培养液3000rpm离心2分钟,去上清,收集2×106个细胞(容积200μL),转移至1.5mL离心管,进行步骤2。
贴壁细胞:去上清,收集2×106个细胞(容积200μL),转移至1.5mL离心管,进行步骤2。
(4)其他液体样本:
1000rpm离心2分钟 ,弃上清,收集沉淀,进行步骤2。
(5)菌液:
培养的菌液,5000rpm离心1分钟,弃上清,收集至少2×106个细菌,进行步骤2。
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