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荧光PCR试剂盒的检测方法常见的局限性主要包括哪几部分

更新日期: 2022-10-26
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DNA提取:对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13,000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存。
检测方法的局限性:
a.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
b.样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
c.阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
d.病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
e.不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
f.试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
g.本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
结果判断:
阳性:检测通道Ct值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道Ct值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现Ct值≤35.0和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无Ct值且无明显的扩增曲线。
质控标准:
阴性质控品:无明显扩增曲线或无Ct值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
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