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肺炎衣原体IgM检测试剂盒的使用步骤介绍

更新日期: 2022-11-04
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肺炎衣原体IgM检测试剂盒实验原理:
将肺炎衣原体包被于微孔板→加入血清,使得抗原抗体结合→37℃育温1小时→洗去未结合的抗体→加入酶结合物→37℃育温1小时→洗去酶结合物→加入底物→加入终止液450nm→读取吸光值→结果计算
实验流程:2×50ul阴性对照、1×50ul阳性对照和稀释后的样本加入到微孔板里→37C育温1小时→洗液洗涤3次→加入50ulHRP酶结合物→37℃育温1小时→洗液洗涤3次→加入100ulTMB底物→室温平衡15分钟→加入100ul终止液→450nm读取吸光度→计算结果
操作步骤:
试剂准备:
1.所有试剂使用前混匀并平衡至室温。
2.洗液20倍稀释:如50ul浓缩洗液加入950ml水。酶结合物1:300稀释(如10ul加入300ul的稀释液)。
3.血清样本1:105稀释,如加入5ul的血清,加520ul的样本稀释液,或者采用两步法稀释,加入10ul病人血清,加入200ul样本稀释液,取出该稀释后的溶液25ul,再加入100ul的样本稀释液(阴性、阳性和标准品按以上比例稀释)。
4.每孔加入50ul的稀释后的液体(空白孔加入样本稀释液)。
5.封膜后,37℃育温1小时,拍干液体。
6.用稀释后的洗液每孔300-350ul洗涤3次。
7.拍干后加入酶结合物的稀释液50ul。
8.封膜后,37℃育温1小时,拍干液体。
9.重复第6步。
10.加入100ul底物,室温放置15分钟。
11.加入终止液100ul。
12.30分钟内检测450/620nm检测吸光度。 
检测的有效性:
检测结果必须符合下列条件,否则重新测试。
1.阳性对照吸光度值必须≥0.8(450nm读取吸光度)
2.阴性对照的平均值必须0.1<NC≤0.4(450nm读取吸光度)
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