植物抗氧化酶（AOE）ELISA试剂盒是一种用于科研领域中定量检测植物样本中抗氧化酶含量的免疫学试剂盒，广泛应用于植物生理、环境胁迫响应、农业生物技术等研究方向。这类试剂盒通常采用双抗体夹心法或竞争法原理，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）实现高灵敏度、高特异性的检测。操作流程：
实验前准备：
试剂平衡：将试剂盒从2–8℃冰箱取出，室温（20–25℃）平衡至少20–30分钟，确保所有液体组分温度一致，避免冷凝影响反应活性。
试剂检查：核对试剂盒组分是否齐全，检查标准品、酶标抗体、显色剂等是否在有效期内，浓缩洗涤液如有结晶，可水浴加热溶解后再稀释使用。
仪器准备：准备好移液器（建议使用排枪）、酶标仪（450nm滤光片）、洗板机或手动洗板设备、37℃恒温箱或水浴锅、一次性吸头等。
样本处理与稀释优化：
样本类型：取新鲜植物组织匀浆液或提取物，避免反复冻融，提取后尽快检测。若需保存，建议-20℃短期储存，避免酶活性下降。
预实验筛选稀释度：使用1–2个代表性样本设置梯度稀释（如1:10、1:50、1:100），确保OD值落在标准曲线线性范围内，避免信号过强或过弱。
加样方式：样本孔先加40μL样品稀释液，再加10μL待测样本，最终稀释5倍；标准品孔直接加50μL不同浓度标准品；空白孔不加任何样品或试剂。
反应体系构建与温育：
加酶标抗体：除空白孔外，每孔加入100μL HRP标记的检测抗体，封板膜密封，37℃避光温育60分钟（部分试剂盒为30分钟，请以说明书为准）。
洗涤操作：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒–1分钟，甩干后拍干吸水纸，重复5次。手工洗板务必彻底，避免残留导致背景过高。
显色与终止：
显色反应：每孔加入显色剂A和B各50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光孵育10–15分钟（部分为30分钟），避免光照导致颜色加深或失真。
终止反应：每孔加入50μL终止液，颜色由蓝色迅速转为黄色，终止后15分钟内完成读数，防止OD值漂移。
数据读取与计算：
酶标仪测定：以空白孔调零，450nm波长测定各孔OD值。
标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，拟合标准曲线（建议使用四参数拟合），根据样本OD值查得浓度后乘以总稀释倍数（如5×n）得到原始样本含量。
