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产品名称:

猪流感(SIV)PCR荧光探针法核酸检测试剂盒

产品型号: 产品时间: 2023-07-05
猪流感(SIV)PCR荧光探针法核酸检测试剂盒适用于检测的咽拭子标本等标本中猪流感 RNA,适用于猪流感感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对猪流感特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对猪流感 RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断

产品概述

猪流感(SIV)PCR荧光探针法核酸检测试剂盒说明书

【产品名称】

商品名称:猪流感(SIV)核酸检测试剂盒(RT-PCR 荧光探针法)

Name :Diagnostic Kit for Swine influenza virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包装规格】48 份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的咽拭子标本等标本中猪流感 RNA,适用于猪流感感染的

辅助诊断。其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对猪流感特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光

RT-PCR 技术对猪流感 RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学

诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

酶液 50μl×1 管

SIV 反应液 1.0ml×1 管

SIV 阳性质控品 50μl ×1 管

阴性质控品 250μl ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 5 次,

有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

采集病人或患病动物的咽拭子标本,应使用采样拭子,适度拭抹咽后壁和两

侧扁桃体部位,应避免触及舌部;迅速将拭子放入标本采集管中,旋紧管盖并密封,

以防干燥。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标

本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理

取 100uL 拭子标本于 1.6mL 灭菌离心管中,按 RNA 提取试剂盒说明书进行提取。

1.2RNA 提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒(离心柱提取

法),请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性

对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂 SIV 反应液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl,分别加入相应的反

应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;荧光通道选择:

检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿

选择 ROX 参比荧光。

4.3推荐循环参数设置:

步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲

线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value

值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35.0<Ct 值≤37,建议重复检测,如果检测通道仍为 35.0<Ct

值≤37,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。

7. 质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32;

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

8. 产品性能指标

阴阳性参考品符合率:5 份阳性参考品符合率为 100%;10 份阴性参考品符合率

为 100%。

低检测限:5.0×102copies/ml。

精密度:批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数(CV)均小于等于 3%。

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