禽传染性支气管炎病毒(AIBV)荧光PCR试剂盒说明书
【产品名称】
商品名称：禽传染性支气管炎病毒(AIBV)核酸检测试剂盒(RT-PCR 荧光探针法)
Name ：Diagnostic Kit for Avian Infectious Bronchitis Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包装规格】48 份/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测的气管渗出物、支气管和肺组织、肾脏或输卵管等标本中
禽传染性支气管炎病毒RNA，适用于禽传染性支气管炎病毒感染的辅助诊断。其检
测结果仅供参考。
【检验原理】
本试剂盒用一对禽传染性支气管炎病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，
用一步法荧光RT-PCR技术对禽传染性支气管炎病毒RNA进行体外扩增检测，用
于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名 称 规 格
酶液 50μl×1 管
AIBV 反应液 1.0ml×1 管
AIBV 阳性质控品 50μl ×1 管
阴性质控品 250μl ×1 管
说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 5 次，
有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
对于急性呼吸道型的病禽，应采取气管渗出物；对于刚扑杀的病禽，采取支气管
和肺组织；对于肾型和产蛋下降型的病禽，应采取发病鸡的肾脏或输卵管。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标
本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1样本前处理
每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.05g 于
研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管
中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100uL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2RNA 提取
推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒(离心柱提取
法)，请按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性
对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 AIBV 反应液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加样(样本处理区)
将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl，分别加入相应的反
应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25ul；荧光通道选择：
检测通道(Reporter Dye)FAM， 淬灭通道(Quencher Dye)NONE，请勿
选择 ROX 参比荧光。
4.3推荐循环参数设置：
步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号
1 1cycle 42℃ 20min 否
2 1 cycle 95℃ 10min 否
3 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 结果分析判定
5.1结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲
线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35.0
值≤37，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。
7. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
8. 产品性能指标
阴阳性参考品符合率：5 份阳性参考品符合率为 100%；10 份阴性参考品符合率
为 100%。
低检测限：5.0×102copies/ml。
精密度：批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数(CV)均小于等于 3%。
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