口蹄疫病毒A型（FMDV-A）荧光PCR检测试剂盒

口蹄疫病毒A型（FMDV-A）荧光PCR检测试剂盒说明书

【产品名称】

商品名称：口蹄疫病毒 A 型（FMDV-A）核酸检测试剂盒(RT-PCR 荧光探针法)

Name ：Diagnostic Kit for Foot-and-mouth Disease Virus Type A RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包装规格】48 份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的水泡皮及水泡液、O/P 液等标本中口蹄疫病毒 A 型 RNA，适用于口蹄疫病毒A型感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对口蹄疫病毒A型特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对口蹄疫病毒A型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 5 次，

有效期 12 个月。

【标本采集】

病死或扑杀动物，取水泡皮及水泡液；待检活动物，取 O/P 液 2~3mL。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标

本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

水泡皮样品：称取水泡皮 0.05g 于研磨器中研磨，加入生理盐水继续研磨，待匀

浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100uL 于 1.5mL 灭

菌离心管中；OP 液或水泡液样品，直接取 100uL 置于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2RNA 提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒（离心柱提取

法），请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性

对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂 FMDV-A 反应液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl，分别加入相应的反

应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25ul；荧光通道选择：

检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿

选择 ROX 参比荧光。

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲

线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道 35.0<Ct 值≤37，建议重复检测，如果检测通道仍为 35.0<Ct

值≤37，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。

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