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产品名称:

东部马脑炎病毒(EEE)荧光PCR核酸检测试剂盒

产品型号: 产品时间: 2023-07-05
东部马脑炎病毒(EEE)荧光PCR核酸检测试剂盒适用于检测的动物的脑海马回部组织、全血等标本中东部马脑炎病毒RNA,适用于东部马脑炎病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对东部马脑炎病毒特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光 RT-PCR 技术对东部马脑炎病毒 RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

产品概述

东部马脑炎病毒(EEE)荧光PCR核酸检测试剂盒说明书

【产品名称】

商品名称:东部马脑炎病毒(EEE)核酸检测试剂盒(RT-PCR 荧光探针法)

Name :Diagnostic Kit for Eastern Equine Encephalitis Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包装规格】48份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的动物的脑海马回部组织、全血等标本中东部马脑炎病毒

RNA,适用于东部马脑炎病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对东部马脑炎病毒特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一

步法荧光 RT-PCR 技术对东部马脑炎病毒 RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对

可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

酶液 50μl×1 管

EEE 反应液 1.0ml×1 管

EEE 阳性质控品 50μl ×1 管

阴性质控品 250μl ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 5 次,

有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀动物的脑海马回部组织 2g;待检活动物,抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na

抗凝管。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标

本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理

每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.05g 于

研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管

中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2RNA 提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒(离心柱提取

法),请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性

对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂 EEE 反应液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl,分别加入相应的反

应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;荧光通道选择:

检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿

选择 ROX 参比荧光。

4.3推荐循环参数设置:

步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲

线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value

值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35.0<Ct 值≤37,建议重复检测,如果检测通道仍为 35.0<Ct

值≤37,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。

7. 质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32;

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

8. 产品性能指标

阴阳性参考品符合率:5 份阳性参考品符合率为 100%;10 份阴性参考品符合率

为 100%。

低检测限:5.0×102copies/ml。

精密度:批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数(CV)均小于等于 3%。

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