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产品名称:

沙门氏菌(SPP)荧光PCR核酸扩增检测试剂盒

产品型号: 产品时间: 2023-07-05
沙门氏菌(SPP)荧光PCR核酸扩增检测试剂盒适用于检测水样粪便,疑似污染的水、食物等样本中的沙门氏菌,用于沙门氏菌感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对沙门氏菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对沙门氏菌的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

产品概述

沙门氏菌(SPP)荧光PCR核酸扩增检测试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称:沙门氏菌 (SPP)核酸扩增检测试剂盒(PCR 荧光探针法)

Name :Diagnostic Kit for Salmonella DNA (PCR Fluorescence Probing)

【包装规格】48T/盒

【储存条件和有效期】

试剂盒保存于-20±5℃,有效期 12 个月;

避免反复冻融,冻融次数不超过 5 次;试剂开瓶后,在室温条件下放置时间不

应超过 8 小时;运输采用干冰(或者冰袋)保持低温,运输时间不应超过 4 天。试

剂盒生产日期见产品标签。

【适用仪器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他荧光定量 PCR 检测仪。

【标本要求】

标本采集:水样便取 0.5~1mL;疑似污染的食物取 1g

保存运输:上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过

6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理

水样便 13000rpm 离心 2min,去尽上清;疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀

后取 0.05g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至

1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL 灭菌离

心管中;疑似污染的水直接取 100uL

1.2DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50uL核酸提取液),

100℃恒温处理 10 分钟,13,000 rpm 离心 5 分钟,取上清液转移至新的 1.5ml

EP 管,-20℃保存;

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂

盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

【预期用途】

本试剂盒适用于检测水样粪便,疑似污染的水、食物等样本中的沙门氏菌,用

于沙门氏菌感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对沙门氏菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术

对沙门氏菌的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

核酸提取液 1.5ml×2 管

酶液 50μl×1 管

SPP 反应液 1.0ml×1 管

SPP 阳性质控品 50μl ×1 管

阴性质控品 250μl ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

 

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性

对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂 SPP 反应液 酶液

用量(样本数为 N) 20μl 1μl

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl,分别加入相应的反

应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)

NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。

4.3 推荐循环参数设置:

步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号

1 1 cycle 95℃ 10min 否

2 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出

现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围

内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上

下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35.0<Ct 值≤37,建议重复检测,如果检测通道仍为 35.0<Ct

值≤37,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。

6. 检测方法的局限性

1)样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2)样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3)阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4)病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5)不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6)试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7)本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

7. 质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32;

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

8. 产品性能指标

阴阳性参考品符合率:8 份阳性参考品符合率为 100%;10 份阴性参考品符合

率为 100%。

低检测限:2.0×102copies/ml。

精密度:批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数(CV)均≤3%。

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行;

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,*混匀并短暂离心;

3.反应液应避光保存;

4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区工作服;

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

 

公司优势:
1)质量:我司提供的的试剂为世界
2)价格:价格实惠,量大从优。
4)服务:提供完整的售前、售后和售中服务。售后到底

如需订购沙门氏菌(SPP)荧光PCR核酸扩增检测试剂盒,请联系我们。

此外公司还提供:

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