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产品名称:

霍乱弧菌O1(VC O1)荧光PCR核酸检测试剂盒

产品型号: 产品时间: 2023-03-08
霍乱弧菌O1(VC O1)荧光PCR核酸检测试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,设计一对霍乱弧菌O1特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对霍乱弧菌的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。在反应体系中含基因组模板的情况下,反应得以进行并释放 荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性、定量分析。

产品概述

霍乱弧菌O1(VC O1)荧光PCR核酸检测试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称:霍乱弧菌O1(VC O1)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)  

Name  :Vibrio cholerae O1 (VC O1) nucleic acid detection kit (fluorescence-PCR method)

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

霍乱弧菌O1(VC O1)是肠杆菌科中一大类重要的致病菌,感染畜禽后可引起一系列的疾病,成为畜禽肉胴体、畜禽产品污染的重要来源,并可以通过各种途径传染给人,引起人的食源性疾病[1]。为有效地预防和控制疾病发生,建立快速、敏感而又特异的检测方法,PCR技术已成为检测食品、临床样品和环境样品中霍乱弧菌O1的重要手段[2,3]。

本试剂盒适用于检测水样粪便,疑似污染的水、食物等样本中的霍乱弧菌O1,用于霍乱弧菌O1感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,设计一对霍乱弧菌O1特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对霍乱弧菌O1的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

注:

1)不同批号试剂不能混用。

2)试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

【标本采集】

水样便取0.5~1mL;疑似污染的食物取1g

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1.样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理

水样便13000rpm离心2min,去尽上清;疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;疑似污染的水直接取100μL

1.2DNA提取

1)对上述处理好的标本加入50μL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13,000 rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;

2)DNA的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:

 

将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中,21uL/管。

3.加样(样本处理区)

将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4.PCR扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光,选择None即可。

5.结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

阳性:检测通道Ct值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑:检测通道Ct值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现Ct值≤35.0和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。

阴性:样本检测结果无Ct值且无明显的扩增曲线。

7.质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无Ct值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

【参考文献】

[1] 曾晓芳. 畜产品中霍乱弧菌O1​污染的检测与控制[J]. 四川畜牧兽医, 2003, 30(4):28-29.

[2] Marijia T, Gorazd A, An improved 16S rRNA based PCR method for the specific detection of Salmonella enteria [J]. International Journal of Food Microbiology, 2003, 80: 67-75.

[3] Judy S W, Karen L J, Suresh D P, et al. Specific detection of Salmonella spp. By multiplex polymerase chain reaction [J]. Applied and Environmental Microbiology, 1993, 59(5): 1473-1479.

公司优势:
1)质量:我司提供的的试剂为世界
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