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产品名称:

猪瘟/高致病性猪蓝耳病病毒(CSFV/PRRSV-HP)荧光探针PCR核酸检测试剂盒

产品型号: 产品时间: 2023-03-08
猪瘟/蓝耳CSFV/PRRSV-HP荧光PCR检测试剂盒根据猪瘟/蓝耳CSFV/PRRSV-HP基因组设计特异性引物和探针,用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒适用于检测分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等样本中的猪瘟/蓝耳CSFV/PRRSV-HP。

产品概述

猪瘟/蓝耳CSFV/PRRSV-HP荧光PCR检测试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称:猪瘟/高致病性猪蓝耳病病毒(CSFV/PRRSV-HP)?核酸检测试剂盒(实时荧光-PCR法)

Name :Nucleic acid detection kit for swine fever / highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (CSFV/PRRSV-HP) (real-time fluorescent -PCR)

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

猪瘟/高致病性猪蓝耳病病毒(CSFV/PRRSV-HP)?感染引起的猪急性、热性、高度接触性传染病。其特征为高热,网状内皮系统出血,死亡率高。家养猪和野猪都可以被感染,而且不分品种和年龄。

本试剂盒适用于检测分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等样本中的猪瘟/高致病性猪蓝耳病病毒(CSFV/PRRSV-HP)?,用于猪瘟/高致病性猪蓝耳病病毒(CSFV/PRRSV-HP)?感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒根据猪瘟/高致病性猪蓝耳病病毒(CSFV/PRRSV-HP)??基因组设计特异性引物和探针,用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

核酸提取液 1.5mL×2 管

酶液 50μL×1 管

ASFV 反应液 1.0mL×1 管

ASFV 阳性质控品 50μL×1 管

阴性质控品 250μL×1 管

注:

1)不同批号试剂不能混用。

2)试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 7 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀猪,取分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1.样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理

组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取

0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;全血样本:待血凝固后,取血清 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2DNA 提取

1)对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒温处理 10min,13,000

rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2)DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒

(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂 ASFV 反应液 酶液

用量(样本数为 N) 20μL 1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3.加样(样本处理区)

 

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4.PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)

NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3推荐循环参数设置:

步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号

1 1 cycle 95℃ 10min 否

2 40 cycles 94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5.结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性,否则为阴性。

阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

6.检测方法的局限性

样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

7.质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行;

试剂盒内各种组分使用前应自然融化,*混匀幵短暂离心;

反应液应避光保存;

反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

试剂盒里所有物品应视为污染物对待,幵按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

[1]国家质量监督检验检疫总局. SN/T 1559-2010 非洲猪瘟检疫技术规范[S].

[2]黄萍, 肖家勇, 欧阳振宇. 非洲猪瘟病毒实时荧光定量 PCR 检测方法的建立[S]. 中国动物检疫, 2010.

[3]董志珍, 侯艳梅, 赵祥平. 非洲猪瘟病毒实时荧光定量 PCR 检测方法的建立[S]. 中国兽医杂志, 2009.

公司优势:
1)质量:我司提供的的试剂为世界
2)价格:价格实惠,量大从优。
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