钩端螺旋体（Lep）荧光探针法PCR检测剂盒

钩端螺旋体(Lep)荧光探针法PCR检测剂盒【检验原理】

本试剂盒采用探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对钩端螺旋体特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对钩端螺旋体​的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对病原学辅助诊断。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

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1.1 DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液（固体标本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒温处理 10min，13,000 rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

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2. 检测方法的局限性

a. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

b. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

c. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

d. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

f. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

g. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

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1.1 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

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