病毒RNA提取纯化试剂

病毒RNA提取纯化试剂是于血清(血浆)等液体样品中提取病毒 RNA 的纯化试剂。本产品回 收率*,尤其适合于整合到临床 RT-PCR 检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样 品和微量样品。

1. 适用于血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等液体样品。

2. 回收率达到 90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。

3. 灵敏度高，RT-PCR 检测到的终灵敏度可以达到 50-100 拷贝/mL(对 HIV 和 HCV)。

4. 一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。

5. 无毒环保。

6. 可放量，如果加上病毒离心富集步骤，每管多可以处理 1.5 mL 液体样品。

常温运输，4℃保存，有效期一年。 

1. 如果有 N 个样品，标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006)，多出的一个为阳性对照，一个为阴性对照。为避免污染， 建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续操作时区别向 心面和离心面。

2. 在离心管中分别加入 0.2 mL 液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼 泪等等），阳性对照和阴性对照。

1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入 0.2mL 自 备生理盐水中挤压出液体，然后取 0.2mL 进行提取。

1.2、 如果是粪便等半固定样品，则取约 0.3mL 的样品，加入 0,3 自备生理 盐水，震荡重悬，离心取 0.2mL 上清进行提取。

1.3、 如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心用上清，也可以直接 取用，但后者提取的 RNA 中有细胞的基因组 DNA 污染。血浆的抗凝剂 必须是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 时由于所加入 ACD 会 增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用 EDTA 低 15%左 右。血浆按 0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。

1.4、 如果样品是实体组织或培养细胞，则需要在自备生理盐水中匀浆后离心，用 0.2mL 上清液（含病毒）进行提取，但此种情况下后得到的 RNA 不可避免的会含有基因组 DNA 污染。

1.5、 如果液体样品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL、用剩下的 0.2mL 继续操作。

3. 在每个离心管中加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液。RNA 病毒裂解液在低温放置会 产生结晶沉淀，需提前 65℃水浴溶解并充分摇匀后取用。

4. 室温放置 10 分钟裂解病毒。

5. 振荡数秒后加入 0.7 mL 室温异丙醇，旋紧盖后振荡 30 秒混匀，把离心管的向 心面对向转头的中央，13,000-15,000 g 室温离心至少 15 分钟。

6. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀（此时可能看不见）。

7. 加入 1.0 mL 室温 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g 室温离心 5 分钟。注意： 在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。

8. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀（此时呈膜状沉淀）。

9. 再短暂离心数秒, 用移液器移弃残留液体（70%乙醇），否则它会影响后续反应。

10. 加入 200 μl RNase-free 水或1×液相 RNase Erasol(能灭活残留 的 RNase, 而 RNase-free 水无此功能)，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁 离心面的膜状 RNA 沉淀，溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含 有 RNA，所以不要离心后取上清使用，必须取混合液使用，哪怕很浑浊。

11. 直接取适量用于 RT-PCR，如果溶于200 uL水,同时样品使用量不超过 RT-PCR 体系的 1/2，不溶物一般不会影响 RT-PCR。剩余样品可以室温放置 2 小时， 也可保存于-80℃保存一个月。 

病毒RNA提取纯化试剂