禽流感H9病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
使用说明书
【产品名称】
通用名:禽流感H9病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza H9 Virus (ELISA)
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【预期用途】 禽流感又名真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,是由A型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)引起的禽类的一种急性、高度致死性传染病,以急性败血性死亡到无症状带毒为特征。
禽流感H9亚型抗体ELISA检测试剂盒(阻断法)用于检测禽类血清中禽流感H9病毒抗体,可用于免疫效果评价、辅助诊断等。
【原 理】
禽流感H9亚型抗体ELISA检测试剂盒(阻断法)由预包被禽流感H9病毒抗原的酶标板、抗体工作液、酶标记物及其他配套试剂组成,应用竞争酶联免疫法原理检测禽血清或血浆中禽流感H9病毒抗体。实验时在酶标板中加入稀释的待检血清和抗体工作液,若样品中含有禽流感H9病毒抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合,从而使后续反应不出现显色;反之则出现显色;显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有禽流感H9病毒抗体。
【试剂盒组成】
序号 | 名称 | 规格/96T×1 | 规格/96T×2 | 规格/96T×5 |
1 | 酶标记物 | 11ml×1(红盖) | 11ml×2(红盖) | 26ml×2(红盖) |
2 | 抗体工作液 | 6ml×1(蓝盖) | 11ml×1(蓝盖) | 26ml×1(蓝盖) |
3 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1(白盖) | 40ml×1(白盖) | 200ml×1(白盖) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白盖) | 11ml×1(白盖) | 26ml×1(白盖) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑盖) | 11ml×1(棕盖) | 26ml×1(黑盖) |
6 | 终止液 | 6ml×1(黄盖) | 11ml×1(黄盖) | 26ml×1(黄盖) |
7 | 阳性对照 | 1.0 ml×1(红盖) | 1.5 ml×1(红盖) | 2.0 ml×1(红盖) |
8 | 阴性对照 | 1.0 ml×1(绿盖) | 1.5 ml×1(绿盖) | 2.0 ml×1(绿盖) |
9 | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 盖板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 说明书 | 1 | 1 | 1 |
【储存及有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。
【样品准备】
蛋黄:取2ml新鲜蛋黄加2ml生理盐水震荡混匀,3000转/分钟离心15分钟,取上清作为样本。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl;样品孔每孔先加入40μl工作洗涤液,再加入10μl待检样本(稀释比例为1:5)。
4.每孔加抗体工作液50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体,每孔加350 ul工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀盖好盖板膜,置37℃避光反应15分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照吸光值≥1.0,阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×50%。
【检验结果的解释】
1.PI=(1-样本值/阴性对照孔均值)×100%;
2.未曾免疫鸡群:PI≥50为阳性;PI<50为阴性。
3.免疫鸡群:监测并记录样本当时的抗体水平,根据结果分析抗体水平的分布及鸡群免疫状态的动向。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测禽流感H9病毒抗体,根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以*溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。