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产品名称:

**色葡萄球菌(SA)核酸检测试剂盒

产品型号: 荧光PCR法 产品时间: 2024-01-18
【产品名称】
商品名称:**色葡萄球菌(SA)核酸检测试剂盒
Name :Staphylococcus aureus (SA) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测标本中指标的定量检测,辅助诊断。

产品概述

【产品名称】

商品名称:**色葡萄球菌(SA)核酸检测试剂盒

Name :Staphylococcus aureus (SA) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)

【包装规格】50T/盒

**色葡萄球菌(SA)核酸检测试剂盒【预期用途】

本试剂盒适用于检测标本中指标的定量检测,辅助诊断。

【试剂组成】

名 称

规 格

酶液

50μL×1 管

反应液

1.0mL×1 管

阳性质控品

50μL ×1 管

阴性质控品

250μL ×1 管

详见说明书

注:

1) 不同批号试剂不能混用。

2) 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【检验原理】

本试剂盒对指标特异核酸序列设计引物和探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对指标 RNA 进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学诊断。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

【标本采集】

拭子:应使用与用采样拭子,适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位,应避免触及舌 部 ; 迅 速 将 拭 子 放 入 标 本 采 集 管 中 , 旋 紧 管 盖 并 密 封 , 以 防 干 燥 。

全血:疑似感染的血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,8000rpm 离心 2min,取适量上清液于 1.5mL 灭菌离心管中。痰: 以清晨的第一口痰为宜。先用清水漱口,嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管,密封,即可送检。

【标本采集】

病死或扑杀禽,取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织;待检活禽,用棉拭子取分泌物或排泄物,置于 1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但丌能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

1.2DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒温处理 10min,13,000rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂*(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2 RNA 提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的DNA 提取试剂*(离心柱提取法请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

反应液

酶液

用量

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3 推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、

stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且有明显的扩增曲线。

可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显曲线的样本建议重复试验,重复试验结果如果同样出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线则为阳性,否则为阴性。

阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

6. 质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线且无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7. 检测方法的局限性

① 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

②样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

③阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

④病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

⑤不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

⑥试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀动物,取水泡皮及水泡液;待检活动物,取 O/P 液 2~3mL。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【产品图片】

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【生产企业】

企业名称:上海晅科生物科技有限公司

上海晅科生物科技有限公司生产的荧光PCR检测试剂盒质量高,价格低,售后有保证。为您的实验保驾护航。

请直接向我司客服索取说明书

本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断。



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