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原代培养对于建成细胞系是至关重要

更新日期: 2019-08-27
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  细胞系指原代细胞培养物经传代成功后所繁殖的细胞群体。也指可长期连续传代的培养细胞。(由此便引申出了后来的有限细胞系、无限细胞系),因此,细胞系狭义的是指可连续传代的细胞(特定环境下口语和书面语都使用),广义是指可传代的细胞。经过40-50次分裂的渡过第二次死亡危机的细胞,称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系;已获无限繁殖能力的细胞系,称连续或无限细胞系。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,可能成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有永生性(不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致死;有的有永生性,异体接种有致瘤性,说明已恶性化。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系,称亚系。
  
  原组织中含有多种类型的异质性细胞,经过培养条件选择,细胞已趋于均一,这些细胞群体可在体外继续增殖和成为某一种种系的细胞群体。因此,原代培养是否成功对于建成细胞系是至关重要的阶段。原代培养成功的关键与以下因素有关:
  
  一、选择合适的原代培养方法
  
  组织块、酶消化和机械分离三种方法,各有优缺点。酶消化法可以获得大量的活细胞.直接培养细胞形成单层,建立细胞系较快速,成功率较高。胰蛋白酶是常用的方法,用于分离组织和常规传代,但胰蛋白酶可能损伤细胞。胶原酶对细胞间质有很好的作用,因此对消化含胶原组织丰富的正常上皮组织和癌组织效果好,对上皮细胞损伤小。组织块法取材组织量小,当不能用其他方法时可用。机械分离方法可快速获取细胞,但间质细胞多,对细胞损伤大,因此,根据组织来源和培养目的选择方法。
  
  二、选择合适的培养条件
  
  原代培养的组织含有多种类型的细胞,要促进所需要的细胞增殖,抑制混杂细胞生长,可按照细胞营养要求,选择合适的培养基。如果要建立上皮细胞系,由于纤维细胞在体外比上皮细胞更易于生长,因此,限制培养基中血清浓度和加人可刺激上皮细胞生长的必要成分,可以促进上皮细胞生长,抑制纤维细胞生长。
  
  三、精心呵护细胞,适时传代和换液
  
  传代时,酶消化细胞要适时,及时换液保持培养液恒定的pH值。避免由于污染或培养中不慎事故,使细胞毁于一旦。要及时从低代的细胞开始冻存,适时复苏细胞,防止传代细胞中断。
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